Inmunoneurología

Real-Time Quaking-Induced Conversion assay (RT-QuIC )

El ensayo de conversión de proteína priónica inducida por agitación en tiempo real (RT-QUIC) es usado para el diagnóstico diferencial de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ). La técnica se basa en la capacidad que tiene la proteína priónica anómala (PrPSc) presente en muestra de líquido cefalorraquídeo de inducir el plegamiento erróneo de una proteína priónica recombinante PrP generada por técnicas de biología molecular. Propiciado por la generación de calor y movimiento, este plegamiento y agregación de la proteína es detectado mediante el uso de tioflavina THT, la cual tiene la capacidad de unirse a proteínas agregadas y cambiar sus propiedades de emisión de fluorescencia (excitación a 450 nm y emisión a 480 nm). La cantidad de proteína agregada es proporcional a la fluoresceína emitida. En el caso de ECJ, el ensayo tiene una sensibilidad del 91% y una especificidad del 98%, siendo capaz de detectar femtogramos de PrPSC presente en una muestra. Próximamente también podremos disponer de esta tecnología para la detección de α-sinucleína en otras enfermedades neurológicas degenerativas.

Cell-based assays (CBA)

Para un adecuado diagnóstico de enfermedades neurológicas inmuno-mediadas, el screening de anticuerpos onconeuronales y de superficie se ha de realizar sobre tejido de cerebelo/cerebro de rata, llevándose a cabo siempre la posterior confirmación de los hallazgos mediante una técnica adecuada. Para ello, el uso de ensayos celulares (CBA) es de gran utilidad. Las células HEK293 (células embrionarias de riñón humano) son transfectadas con el antígeno de interés y la presencia de anticuerpos es detectada mediante el uso de inmunofluorescencia indirecta. Esta técnica basada en células transfectadas permite detectar y confirmar multitud de anticuerpos debido al amplio número de antígenos que pueden ser testados y a la gran sensibilidad que aporta.

Tecnología Single Molecule Array (SIMOA) Quanterix®

La Tecnología Single Molecule Array (Simoa) Quanterix® se basa en la utilización de bolas paramagnéticas recubiertas con anticuerpos que se unen a una molécula de interés, pudiendo ser detectada a través de la generación de un producto fluorescente. Esta tecnología ha sido desarrollada para medir una amplia variedad de analitos en múltiples muestras biológicas, como suero, plasma, líquido cefalorraquídeo o extractos celulares, pudiendo detectar concentraciones de femtogramos (fm/mL). Así, ofrece una mayor sensibilidad en comparación con ELISAs tradicionales. Una de las aplicaciones que está ganando gran importancia es la cuantificación de neurofilamentos ligeros, tanto en plasma como en líquido cefalorraquídeo. Estos son componentes importantes del citoesqueleto neuronal, el cual proporciona soporte estructural a los axones. Se ha observado liberación de neurofilamentos tras daño axonal o degeneración neuronal, por lo que su detección ha sido asociada con numerosas enfermedades neurodegenerativas.