Servei d'Anatomia Patològica

Prosigna

 

Prosigna és una anàlisi molecular del càncer de mama que utilitza la signatura genètica PAM50 per determinar el subtipus intrínsec del tumor, així com estimar amb fiabilitat el risc de recurrència de la malaltia en un termini de 10 anys. El test classifica el risc en un rang baix, intermedi i alt, basat en una escala de 100 punts.

Aquest està especialment indicat en dones postmenopàusiques operades de càncer de mama en estadis I, II o IIIA i amb receptors hormonals positius.

 

Next Generation Sequencing a Tumors Sòlids

 

Oncomine FOCUS és un panell de NGS que permet avaluar la presència d'alteracions genètiques a 52 gens rellevants per al diagnòstic o tractament de tumors sòlids, entre els quals inclou el càncer de pulmó, còlon i melanoma.

L'assaig analitza la presència de mutacions hotspots (SNV, indels de 35 gens: AKT1, ALK, AR, BRAF, CDK4, CTNNB1, DDR2, EGFR, ERBB2, ERBB3, ERBB4, ESR1, FGFR2, FGFR3, GNA1 , HRAS, IDH1, IDH2, JAK1, JAK2, JAK3, KIT, KRAS, MAP2K1, MAP2K2, MET, MTOR, NRAS, PDGFRA, PIK3CA, RAF1, RET, ROS1, SMO), Copy Number Variations (19 gens: AKT1, GEN , BRAF, CCND1, CDK4, CDK6, EGFR, ERBB2, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, KIT, KRAS, MET, MYC, MYCN, PDGFRA, PIK3CA) i fusions gèniques (23 gens: ABL1, ALK, AKT, BRAF, EGFR, ERBB2, ERG, ETV1, ETV4, ETV5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, MET, NTRK1, NTRK2, NTRK3, PDGFRA, PPARG, RAF1, RET, ROS1) a partir d'ADN i ARN en un sol flux treball.

 

Genotipat VPH

 

La genotipificació per al virus del papil·loma humà d'alt risc (VPH-AR) 16 i 18 ofereix al metge la capacitat d'identificar les dones amb més risc de desenvolupar càncer cervical. El test per al VPH de la plataforma coves 4800 (Roche Diagnostics) és un sistema totalment automatitzat de PCR a temps real, validat per la FDA i que detecta per separat els genotips 16 i 18 a més d'altres 12 genotips d'alt risc (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) en mostres de citologia líquida de l'àrea anogenital o de la regió orofaríngia.

L'assaig de sonda de línia de la plataforma INNOLiPA® es basa en el principi d'hibridació inversa i permet la identificació de 32 genotips diferents del VPH (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39 , 40, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 59, 61, 62, 66, 67, 68, 70, 73, 81, 82, 83 i 89). L'assaig està dissenyat per a la detecció simultània dels diferents genotips i accepta mostres tant de citologia com de teixit parafinat.

 

Consulta diagnòstica en hematopatologia

 

Som un laboratori especialitzat en el diagnòstic de càncers hematològics, entre els quals s'inclouen la leucèmia, el limfoma i el mieloma. També actuem com a centre de referència de diagnòstic per a molts assajos clínics nacionals i internacionals i donem servei a més de 2 milions d'habitants.

El diagnòstic hematopatològic requereix la integració de diverses tècniques, encara més en els casos complexos que no encaixen en una entitat concreta. Posem a disposició dels sol·licitants tots els nostres recursos humans i tecnològics per arribar a un diagnòstic definitiu en aquests casos,

La consulta diagnòstica permet integrar els resultats de les diferents tècniques de biologia molecular amb la clínica i la histopatologia. L'àmplia experiència dels membres d'aquesta àrea d'excel·lència i la tecnologia disponible ens converteix en el millor centre per a la revisió de casos per fer una confirmació diagnòstica i/o reavaluació de casos complexos.

 

Estudi de la funció plaquetària

 

L'àrea d'Hemostàsia i Eritropatologia disposa de dos equips per a l'estudi de l'agregació plaquetària i d'agregació i alliberament del contingut dels grànuls intraplaquetaris, respectivament. Totes dues són tècniques altament manuals i específiques, per a les quals es requereix personal expert i per a les que som centre de referència a nivell estatal.

 

 

Consulta diagnòstica en nefropatologia

 

Oferim el millor servei de consulta i revisió diagnòstica de casos complexos tant de patologia de ronyó nadiu com patologia del trasplantament.

La consulta de nefropatologia es realitza per patòlegs experts en patologia renal. Comporta la realització de procediments i tincions adequats en funció del material rebut, la informació del pacient i les troballes específiques del cas per determinar-ne un diagnòstic. La interpretació diagnòstica òptima d'una biòpsia renal mèdica requereix la integració de les troballes de la microscòpia òptica, la immunofluorescència i la microscòpia electrònica juntament amb les dades clíniques i de laboratori del pacient. Per a l'avaluació diagnòstica i l'informe final de les malalties renals no neoplàsiques se segueixen les guies de patologia renal més actualitzades.

Tècniques destacades:

• Tincions especials: àcid periòdic de Schiff (PAS), tricròmic de Masson i metenamina-plata de Jones
• Immunofluorescència: IgA, IgG, IgM, C1q, C3, C4d, fibrinogen, cadena lleugeres lleugeres kappa i lambda
• Subtipificació d'IgG: IgG1 (IFD), IgG2 (IFD), IgG3 (IFD) i IgG4 (IHQ)
• Immunonohistoquímica: PLA2R, AntiTHSD7a, AntiDNAJB9
• Tipificació amiloide: cadenes lleugeres, amiloide A, TTR
• Microscòpia electrònica de transmissió

 

Immunofluorescència directa cutània

 

Mitjançant la immunofluorescència directa es pot identificar lexpressió de les immunoglobulines, les cadenes lleugeres Kappa i Lambda, factors del sistema de complement o fibrinogen sobre teixit congelat. En dermatopatologia, la immunofluorescència directa cutània és de gran utilitat en el diagnòstic de les malalties cutànies autoimmunes, malalties ampul·loses autoimmunes, vasculitis cutànies i sistèmiques, liquen pla i alopècies cicatricials.

Adicionalment es realitza el mapeig antigènic de la membrana dermoepidèrmica per al diagnòstic de les epidermòlisis ampul·loses hereditàries utilitzant un panell d'anticossos monoclonals dirigits contra la laminina 332, col·làgens IV i VII, integrina β4 i integrina α6.

 

Determinació de PD-L1

 

PD-L1 és una proteïna que ajuda que les cèl·lules immunes no ataquin les cèl·lules que l'expressen. Alguns neoplàsies expressen PD-L1 i "enganyen" al sistema immunitari evitant ser detectats i atacats com a substàncies estranyes i perjudicials. Si un tumor presenta PD-L1, pot ser que us beneficiï el tractament amb immunoteràpia que estimula el sistema immunitari del propi pacient perquè reconegui i combati les cèl·lules tumorals.

La prova que analitza la quantitat de PD-L1 mitjançant immunohistoquímica es fa servir per esbrinar si la immunoteràpia podria ser beneficiosa per al tractament de determinades neoplàsies com càncer de pulmó, mama, bufeta urinària, cap i coll.

 

Determinació de HER2

 

Algunes persones amb càncer de mama o càncer gàstric presenten un excés del nombre de còpies del gen HER2 i de la quantitat de proteïna que aquest produeix. Els tumors que compleixen aquesta condició es consideren positius per a HER2. Aquests càncers tendeixen a créixer i propagar-se més ràpid que altres tipus de càncer, però poden respondre al tractament amb fàrmacs dirigits que tenen com a diana HER2.

L'amplificació de gen HER2 es pot determinar mitjançant estudi immunohistoquímic o ISH en mostres tant histològiques com de citologia

 

Consulta diagnòstica de lesions melanocítiques complexes

 

No sempre és fàcil distingir entre una lesió melanocítica inusual però no neoplàstica i un melanoma. Per això disposem de les tècniques de diagnòstic més avançades que poden ajudar a avaluar amb precisió un tumor. Els patòlegs i altres experts que fan aquestes proves se centren en la cura del càncer de pell i del melanoma en particular. Tenim l'experiència necessària per garantir que els nostres usuaris rebin un diagnòstic correcte per personalitzar la vostra atenció en la mesura del possible

FISH

Les proves moleculars, com la hibridació fluorescent in situ (FISH) s'utilitzen per analitzar l'ADN de lesions melanocítiques sospitoses a la pell i ajudar a fer diagnòstics difícils. Són especialment útils per diagnosticar el melanoma nevoide i el melanoma spitzoide que poden semblar tumors cutanis benignes al microscopi.

Proves genòmiques per al melanoma avançat

Les proves genòmiques també es denominen seqüenciació del tumor o perfil molecular. Consisteix a examinar les cèl·lules obtingudes del melanoma per veure si hi ha mutacions genètiques (canvis en els gens) que puguin estar relacionades amb aquest tipus de càncer.

En el cas de les persones amb malaltia avançada, els nostres experts utilitzen la prova Oncomine Focus. Aquesta prova cerca mutacions, indels i CNV en 52 gens alhora. També realitzem en poques hores el test genètic Idylla per a la detecció de mutacions a BRAF.

En funció de les mutacions que trobem, podrem recomanar una teràpia dirigida que hagi estat aprovada per als canvis específics del tumor.

La informació genètica sobre el tumor també ens ajuda a predir les possibilitats que el càncer torni després del tractament ia evitar els tractaments que no funcionin.

 

Caracterització de MSI, BRAF, EGFR i RAS

 

Les proves IdyllaTM serveixen per a la detecció de mutacions als gens KRAS, NRAS-BRAF, EGFR i la detecció d'inestabilitat de microsatèl·lits en mostres de teixit parafinat, citologia o biòpsies líquides i ofereixen un procés totalment automatitzat, ràpid i fàcil interpretació.

 

Next Generation Sequencing a Hematopatologia (panells per a neoplàsies hematològiques)

 

El nostre laboratori ha estat pioner en la implementació de la tecnologia de NGS en el diagnòstic hematopatològic. Actualment, disposem de diferents panells de NGS específics segons el tipus de patologia.

Per a la caracterització molecular de les neoplàsies mieloides, utilitzem el panell de NGS Oncomine Myeloid Research Assay (ThermoFisher Scientific), que permet avaluar tant la presència de les mutacions com dels gens de fusió més rellevants en aquest tipus d'entitats, incloent-hi no només a la leucèmia mieloide aguda sinó també a les síndromes mielodisplàsiques ia les neoplàsies mieloproliferatives. Aquest panell analitza mutacions de 40 gens i 29 gens implicats en fusions, i en concret cobreix tota la regió codificant de 17 gens (ASXL1, BCOR, CALR, CEBPA, ETV6, EZH2, IKZF1, NF1, PHF6, PRPF8, RB1, RUNX SH2B3, STAG2, TET2, TP53 i ZRSR2), les regions “hotspot” de 23 gens (ABL1, BRAF, CBL, CSF3R, DNMT3A, FLT3, GATA2, HRAS, IDH1, IDH2, JAK2, KIT, KRAS, MPL, MYD NPM1, NRAS, PTPN11, SETBP1, SF3B1, SRSF2, U2AF1 i WT1) i tots els gens de fusions coneguts de 29 drivers (ABL1, ALK, BCL2, BRAF, CCND1, CREBBP, EGFR, ETV6, FGFR1, FG , JAK2, KMT2A (MLL), MECOM, MET, MLLT10, MLLT3, MYBL1, MYH11, NTRK3, NUP214, PDGFRA, PDGFRB, RARA, RBM15, RUNX1, TCF3 i TFE3).

En el cas de les neoplàsies limfoides, disposem de dos panells de NGS. D'una banda, el panell de NGS Lymphoma Solution (Sophia Genetics) inclou l'anàlisi de 54 gens recurrentment alterats en neoplàsies limfoides de cèl·lules B, i està optimitzat per a DNA obtingut a partir de material fixat i inclòs a parafina. En concret, el panell cobreix tota la regió codificant dels gens següents: ARID1, B2M, BCL2, CCND3, CD58, CHD2, CDKN2A, CDKN2B, CIITA, CXCR4, EP300, FOXO1, GNA13, ID3, IRF4, MAL, MEF , MLL2, MYC, MYD88, NFKBIE, PAX5, PIM1, POT1, PRDM1, PTPN1, REL, SOCS1, TNFAIP3, TNFRSF14 i TP53, i les regions “hotspot” d'ATM, BCL6, BIRC3 , BRAF, BT CD79A, CD79B, CREBBP, EZH2, FBXW7, KRAS, NOTCH1, NOTCH2, NRAS, PLCG2, PTEN, SF3B1, STAT6, TCF3 i XPO1.

D'altra banda, per a l'estudi molecular de la leucèmia limfàtica crònica disposem del panell Chronic Lymphocytic Leukaemia Solution (Sophia Genetics), que detecta alteracions en 20 gens i regions cromosòmiques freqüentment implicats en la patogènesi d'aquest tipus de leucèmia. Aquest panell inclou l'anàlisi de l'estat mutacional del gen de les immunoglobulines així com de les mutacions de TP53 i dels gens relacionats amb la resistència als nous fàrmacs dirigits a ibrutinib (BTK i PLCG2) i venetoclax (BCL2).

 

PCR Digital

 

La PCR digital és una tècnica molt sensible i precisa que permet la detecció i quantificació d'àcids nucleics. Al nostre laboratori, disposem del sistema de PCR digital de Bio-Rad, que es basa en el fraccionament de la mostra en droplets o nanogotes, a nivell de les quals es realitza l'amplificació per PCR, i en la lectura individual d'aquestes droplets per obtenir de manera molt precisa la quantificació absoluta de la diana d'interès.

Al nostre laboratori, analitzem mitjançant PCR digital tota una sèrie de mutacions recurrents que ens serveixen com a marcadors moleculars al diagnòstic com són JAK2 V617F, KIT D816V i SF3B1 K700E en neoplàsies mieloides, MYD88 L265P i BRAF V600E en neopla /C i KRAS G12/13 en lesions quístiques pancreàtiques. També estudiem mitjançant PCR digital la mutació T315I del gen BCR-ABL1 a leucèmia mieloide crònica. A més, hem implementat la PCR digital per al seguiment de la malaltia mínima residual en pacients amb neoplàsies mieloides sotmesos a tractaments d'alta eficàcia. En aquests casos, monitoritzem tant mutacions recurrents (com són IDH1 R132 i IDH2 R140Q/R172K) com mutacions específiques mitjançant el disseny d'assajos personalitzats per a cada pacient