Programes de Cribratge Poblacional

Cribratge no invasiu prenatal en sang materna (NIPT, Illumina, NGS)

El NIPT (de l'anglès, noninvasive prenatal testing) és una prova de cribratge per a la detecció d'aneuploïdies fetals en mostres de sang materna de dones embarassades (>10 setmanes de gestació). Fins fa poc, només hi havia dues proves prenatals per a la detecció de les aneuploïdies més freqüents (trisomia 21, 13 i 18): el cribratge bioquímic i la realització d'una prova invasiva (amniocentesi o biòpsia de vellositats coriòniques). Ambdues proves presenten desavantatges respecte de l'opció NIPT. Els cribratges bioquímics ofereixen menor precisió i menor taxa de detecció, i els procediments invasius comporten un risc de pèrdua de l'embaràs. L'ús del NIPT en el diagnòstic prenatal permet incrementar la taxa de detecció d'aquestes aneuploïdies (que pot arribar al 99,7% per a la trisomia 21) i reduir el nombre de procediments invasius de confirmació (fins a un 89%).

El sistema utilitzat per a la detecció prenatal d'aneuploïdies fetals mitjançant la seqüenciació massiva de l'ADN fetal lliure circulant en sang materna. la seqüenciació utilitzant el seqüenciador NextSeq550Dx, i permet la seqüenciació simultània de 24, 48 o 96 mostres. Les dades de seqüenciació generades s'analitzen mitjançant un programari de casa comercial (Illumina). El risc d'aneuploïdies es valora mitjançant el càlcul de l'NCV (valor normalitzat de cada cromosoma), que compara el nombre de lectures dels cromosomes a valorar, en aquest cas els cromosomes 13, 18 i 21, respecte a uns cromosomes de referència de la mateixa mostra. Un excés en el nombre de lectures indicarà la presència d'una aneuploïdia al cromosoma determinat. A més, s'inclou el càlcul de la fracció fetal (percentatge d'ADN d'origen fetal). L'ADN circulant és majoritàriament d'origen matern i, en menor proporció, d'origen fetal. No obstant això, la mida de l'ADN matern és lleugerament superior a l'ADN fetal, per la qual cosa l'anàlisi de la mida dels fragments seqüenciats permetrà determinar el percentatge d'ADN fetal lliure present a la sang materna. Com s'ha comentat, el NIPT presenta un alt nivell de sensibilitat (>99% per a T21 i >98% per a T18 i T13) i especificitat (>99 %), superiors als del cribratge sèric tradicional. 

Inclusió de proves de segon nivell a Cribratge Neonatal mitjançant Espectrometria de masses en tàndem (LC/MSMS)

Al Programa de Cribratge Neonatal de Catalunya som pioners a nivell nacional en l'ús de proves de segon nivell (de l'anglès, second tier test). Les proves de segon nivell són proves addicionals específiques que es realitzen a la mostra inicial de sang impregnada en paper d'aquells nounats que hagin presentat un resultat alterat al cribratge.

Només en cas que en aquest estudi addicional s'obtingui un resultat alterat serà realment necessari dur a terme accions per identificar o descartar una malaltia. La inclusió d'aquesta estratègia al Programa de Cribratge Neonatal de Catalunya ha augmentat l'eficiència del Programa, incrementant el valor predictiu positiu a un 95% i reduint la taxa de falsos positius a menys d'un  0,001%. Això suposa una disminució del nombre de sol·licitud de segones mostres a les famílies, i del nombre de nadons derivats a les unitats clíniques de referència per confirmar/descartar el diagnòstic, i en conseqüència es redueix l'ansietat i l'estrès generat a les famílies. Som pioners en la inclusió d'aquestes proves a nivell nacional, per a 8 de les 24 malalties incloses al nostre panell. Alguns exemples serien, la determinació d'àcid metilmalònic, àcid metilcítric i homocisteïna, per a les malalties relacionades amb el metabolisme del propionat i de l'homocisteïna, i la determinació de proteïna associada a pancreatitis (PAP) per a la detecció de fibrosi quística.

 
Quantificació de Cercles d'Escissió del Gen del Receptor de Limfòcits T (TREC) en sang impregnada en paper

Els TREC  (de l'anglès, T-cell Receptor Excision Circles) són el biomarcador emprat per al cribratge neonatal de la immunodeficiència combinada greu (IDCG). Els TREC són molècules d'ADN circulars estables formades pel reordenament del gen del receptor del limfòcit T durant la seva diferenciació en l'estafa, sent un marcador de limfòcits T recentment formats (aquesta població cel·lular està extremadament disminuïda en la majoria dels nadons amb una IDCG). La quantificació de TREC a la sang impregnada en paper (discos de 1,5 mm de diàmetre) es realitza amb el kit EnLite Neonatal TREC (Perkin Elmer). Aquesta metodologia és una amplificació d'àcids nucleics mitjançant PCR i posterior lectura fotomètrica mitjançant fluorescència a temps resolt i transferències d'energia de ressonància (de l'anglès TR-FRET).

La realització d'aquesta prova està indicada com a prova ràpida davant la sospita d'una immunodeficiència primària, especialment en el cas d'IDCG, així com per al seguiment del tractament amb trasplantament de progenitors hematopoètics en aquests pacients.

Analitzador automàtic per a la determinació quantitativa de sang oculta en femta

La metodologia emprada és la immunoturbidimetria a partir de l'aglutinació de partícules de làtex unides a anticossos que detecten de manera específica l'hemoglobina humana. L'analitzador automàtic emprat assoleix un flux de treball de 320 determinacions/hora.< /p>

La prova immunològica de detecció de sang oculta en femta és l'única que ha demostrat la seva eficàcia en assaigs controlats aleatoritzats (nivell d'evidència 1, grau de recomanació A). En estudis europeus poblacionals, la reducció de la mortalitat per càncer colorectal ha estat del 15-18%, si bé s'estima que aquesta reducció pot arribar fins al 30%. La sensibilitat d'aquesta prova varia entre el 85 i el 95% i l'especificitat pot assolir el 94%. 

Cromatografia líquida acoblada a l'espectrometria de masses en tàndem

La cromatografia líquida acoblada a l'espectrometria de masses en tàndem (LC-MS/MS) és una potent tècnica analítica que ha revolucionat el laboratori clínic aquests darrers anys. Presenta grans avantatges permetent analitzar amb molt poca quantitat de mostra un ampli espectre de substàncies en temps curts, que alhora es poden identificar i quantificar amb una gran selectivitat, sensibilitat i especificitat.  L'aplicació d'aquesta tecnologia ens ha permès ampliar el cribratge neonatal de Catalunya de 3 a 20 malalties.